Modulul V – Tehnici de biologie moleculară reunește două cursuri susținute de Dr. Mihaela Dragomir, la momentul susținerii cursului biolog principal, doctorand, activând în cadrul Institutului Clinic Fundeni - București, și acoperă două tehnici fundamentale utilizate în diagnosticul și cercetarea moleculară modernă.

• Tehnica de PCR
• Tehnica de MLPA

Primul curs este dedicat tehnicii PCR și variantelor sale, prezentând principiile amplificării specifice a ADN-ului, componentele reacției și etapele ciclului termic — denaturare, aliniere, elongare și răcire. Sunt detaliate parametrii critici care influențează eficiența reacției, diferențele dintre PCR clasic și real-time PCR (qPCR), precum și abordările de cuantificare absolută și relativă a expresiei genice. Cursul subliniază importanța standardizării, a controalelor și a integrării rezultatelor PCR cu alte tehnici moleculare pentru o evaluare biologică și clinică riguroasă.

Al doilea curs abordează tehnica MLPA, metodă semicantitativă pentru identificarea variațiilor de număr de copii — deleții și duplicații — la nivel genomic. Sunt explicate structura sondelor MLPA, etapele metodei de la hibridizare și ligare până la amplificare și separare capilară, precum și interpretarea electroferogramelor și analiza relativă a numărului de copii. Cursul evidențiază avantajele MLPA — sensibilitate crescută și aplicabilitate multiplexă — dar și limitările sale și necesitatea confirmării rezultatelor prin tehnici complementare, atât în diagnosticul mutațiilor germinale cât și somatice.

Împreună, cele două cursuri oferă o înțelegere solidă a tehnicilor de amplificare moleculară și a aplicațiilor lor în genotipare, detectarea variațiilor genetice și monitorizarea moleculară, constituind baza practică pentru integrarea acestor metode în protocoalele moderne de diagnostic și cercetare.